證券簡稱:海能技術
證券代碼:430476
       
       

紫外可見分光光度法檢測 蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留

1 前言

在蔬菜生長過程中,有機磷和氨基甲酸酯類農藥對蔬菜上的多種害蟲均有較好的防效作用。但是,殘留在蔬菜或水果中的農藥進入到有機體內具有積累效果,會對生物體內膽鹼酯酶具有抑制作用,使其失去分解乙酰膽鹼的能力,造成乙酰膽鹼積累,引起神經功能紊亂,從而導致肌體的損害。現在比較成熟的理化檢測方法一般步驟複雜,所用時間長,且儀器昂貴。分光光度儀通過農藥對酶的抑制可檢測出農藥殘留是否在合格範圍內,具有簡單、快速、成本低等特點。

2 儀器與試劑

2.1 儀器


Hanon i2可見分光光度計,天平。

2.2 試劑

pH8.0緩衝溶液:分別取11.9g無水磷酸氫二鉀與3.2g磷酸二氫鉀,用1000mL蒸餾水溶解。

顯色劑分別取160mg硫代乙酰膽鹼,加3.0mL蒸餾水溶解,搖勻後置4℃冰箱中保存備用。保存期不超過兩週。

底物:取25.0mg硫代乙酰膽鹼,加3.0mL蒸餾水溶解,搖勻後置4℃冰箱中保存備用。保存期不超過兩週。

乙酰膽鹼酯酶:根據酶的活性情況,用緩衝溶劑溶解,3min的吸光度變化值ΔA0值應控制在0.3以上。搖勻後置4℃冰箱中保存備用,保存期不超過四天。

可選用由以上試劑製備的試劑盒。乙酰膽鹼酯酶的ΔA0值應控制在0.3以上。

3 實驗方法

在一定條件下,有機磷和氨基甲酸酯類農藥對乙酰膽鹼酶正常功能有抑制作用,其抑制率與農藥的濃度呈正相關,正常情況下,酶催化神經傳導代謝產物(乙酰膽鹼)水解,其水解產物與顯色劑反應產生黃色物質,用分光光度計在412nm處測定吸光度隨時間的變化值,計算出抑制率,通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機磷和氨基甲酸脂類農藥存在。

3.1樣品製備

選取有代表性的蔬菜樣品,沖洗掉表面泥土,剪成1cm左右見方碎片

取樣品1g左右,放入燒杯或提取瓶中,加入5mLpH8.0緩衝溶液,振盪1min~2min,倒出提取液,靜置3min~5min待用。

  


 

3.2 對照測試

先於試管中加入2.5mL緩衝溶液,再加入0.15mL酶液、0.1mL顯色劑,搖勻後於37℃左右的溫度放置15min以上(每批樣品的控制時間應一致)。加入0.1mL底物搖勻,此時檢液開始顯色反應,應立即放入儀器比色池中,記錄反應3min的吸光度變化值ΔA0

3.3樣品測試

先於試管中加入2.5mL樣品提取液,其他操作與對照溶液測試相同,記錄反應結果。

4 結果與討論

4.1 實驗結果


結果以酶被抑制的程度(抑制率)表示。





4.2 結論

當蔬菜樣品提取液對酶的抑制率≥50%時,表示蔬菜中有高劑量有機磷或氨基甲酸脂類農藥存在,樣品爲陽性結果。陽性結果的樣品需要重複檢測2次以上。

對陽性結果的樣品,可使用其他方法進一步確定具體農藥品種和含量。

通過實驗測得的幾種蔬菜中的酶抑制率均<50%,在合格範圍內,此方法操作簡單,節省了實驗成本。

 

參考文獻

[1] GB/T 5009.199 蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速檢測[S].

 

注意事項

對照溶液和樣品加入酶液和顯色劑後放置的時間要一致,保證結果的準確性。加入0.1mL底物後儘量快速搖勻放入儀器中檢測吸光度變化值。